离子交换色谱柱常见问题分析

离子交换色谱的基本原理：

离子交换色谱是蛋白纯化技术中常用的一种纯化方法，其原理是指被分离物质所带的电荷可与离子交换剂所带的相反电荷结合，这种带电分子与固定相之间的结合作用是可逆的，在改变pH或者用逐渐增加离子强度的缓冲液洗脱时，离子交换剂上结合的物质可与洗脱液中的离子发生交换而被洗脱到溶液中。由于不同物质的电荷不同，其与离子交换剂的结合能力也不同，所以被洗脱到溶液中的顺序也不同，从而被分离出来。

离子交换色谱柱常见问题分析：

1.纯化后样品纯度不高怎么办？
若目标蛋白和杂蛋白等电点差异较大，目标蛋白通过穿透步骤获得，通过调节起始缓冲液pH，使目标蛋白与填料之间的静电作用更强；
若目标蛋白和杂蛋白等电点差异较小，目标蛋白通过洗脱步骤获得，过调节起始缓冲液pH，使目标蛋白与填料之间的静电作用更强；再调节洗脱溶液的离子强度和pH，使目标蛋白与杂蛋白逐渐分离；
选择合适的离子交换填料及粒径；
柱没有经过起始缓冲液的充分平衡；
降低洗脱流速；
调整样品溶液黏度。
2.纯化后的蛋白收率较低怎么办？
调整样品pH，使样品pH与起始缓冲液pH保持一致；
改变洗脱模式，如将线性梯度模式改变为阶段性梯度洗脱；
改变洗脱方法，如将pH洗脱方法改为盐梯度洗脱方法；
改变洗脱强度。
3.样品过于粘稠怎么处理？
样品过于粘稠可能是由于含有的蛋白太多，或者含有大分子量的核酸分子，通常有以下解决方法：
增加裂解前稀释细胞所用体积；
增加裂解时间，直至黏度下降，或者增加DNase和Mg2+的剂量；
增加机械裂解细胞的效率；
降低上样流速。