生物分析色谱柱的选择

 

　　生物分析色谱柱就是填装有固定相的柱管。宏观上，色谱柱是由柱管和填料组成，那么生物分析色谱柱的选择就要从填料和柱管规格来选择。

 

　　1.填料的选择：即根据化合物的属性选择适合其分离的色谱模式及固定相。

 

　　2.柱规格选择：生物分析色谱柱规格的选择要从内径和柱长两个指标来考虑。不同内径的色谱柱用途：2.1mm和3.0mm内径色谱柱一般用于超液相色谱分析UPLC（分析时间短，效率高）；4.6mm内径色谱柱一般用于常规液相色谱分析HPLC；10.0-300mm内径色谱柱一般用于制备色谱PreHPLC。不同柱长色谱柱优势：UPLC一般柱长为50-100mm；常规HPLC和PreHPLC中，50-100mm柱长适用于易分离样品，且分析时间短。150-300mm柱长适于难分离或分离度要求高的样品，分析时间长。柱长越长，其柱效越高，但由于装柱技术限制，300mm以上长度，柱效会相对更低，因此很少有大于300mm的柱长。

 

　　微观上，色谱柱填料的规格又包括粒径，孔径，比表面积，封尾程度。粒径：色谱柱所装填料的颗粒直径。粒径大小一般有1.7μm，2.7μm，3.5μm，5μm，10μm，15μm，20μm，20-40μm，40-60μm。其中1.7-3.5μm主要用于UPLC快速分析，5μm填料主要用于常规HPLC，10μm-20μm通常用于高压制备色谱（PreHPLC），20-40μm和40-60μm为粒径不均匀填料，用于中低压制备色谱（MPLC）。

 

　　粒径越小，柱压越高，分离度及灵敏度也越高。孔径：填料颗粒的表面和内部的孔的尺寸。100?，150?，200?，300?（更适合分离空间结构较大的大分子化合物，如核苷酸，蛋白等）。比表面积：单位质量填料颗粒表面和内部孔的面积之和。比表面积越大，与样品的接触位点越多，载样量越大，对样品的保留越强，柱效越高。

 

　　封尾：将硅胶颗粒表面的裸露的硅羟基用小分子硅烷键合掉。封尾降低了硅胶填料的活性，减少填料对碱性化合物形成氢键而造成的拖尾。同时封尾的色谱柱比不封尾的少了氢键作用的选择性，因此对组分复杂样品更适合选择不封尾或一次封尾的色谱柱。